注射用甲磺酸左氧氟沙星為喹諾酮類廣譜抗菌 藥物，其為氧氟沙星左旋體，抗菌活性約為氧氟沙星 的 2 倍，抗 菌譜 廣、抗 菌作 用強 ，但對 厭氧 菌抗 菌作 用較差。2015 年版《中國藥典( 四部) 》通則 1101 無菌檢 查法136 － 140 規(guī)定，藥品進行無菌檢查前，應(yīng)首先進行方 法適用性試驗，以確定其適宜性，避免造成微生物漏檢。 因為大部分藥品對微生物有一定的抑菌性，特別是抑菌 性很強的抗菌類藥品，受微生物污染后，微生物受其抑 菌性的影響不能正常繁殖，細胞受損傷但并未死亡，服用該藥品后，藥品在患者體內(nèi)的抑菌性逐漸減弱，受損微 生物逐漸復(fù)蘇并進行正常繁殖，從而對患者造成危害。 常規(guī)方法無法檢出藥品污染微生物情況，只能通過稀釋 液或培養(yǎng)基稀釋、薄膜過濾、加中和劑或滅活劑等方法 消除藥品的抑菌性后才可充分檢出污染微生物。

儀器: HTY － 601 型集菌儀( 杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備 有限公司) ; SHINVLMQC 型壓力蒸汽滅菌器( 山東新華醫(yī) 療器械股份有限公司) ; WGP － 600 型恒水式電熱恒溫培 養(yǎng)箱( 重慶萬達實驗儀器廠) ; LRH-250型生化培養(yǎng)箱( 上 海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; HFsafe － 760S 型生物安全柜 ( 上海力申科學(xué)儀器有限公司) ; PB － 10 pH 酸度計( 德國 Sartorius 公司) ; 渦旋振蕩儀( 德國 IKA 公司) ; DGB220 型 薄膜過濾器( 杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司) 。 試藥: 注射用甲磺酸左氧氟沙星注射劑[陜西博森 生物制藥股份集團有限公司，批號為 20170428 － 5，規(guī) 格為 0． 3 g( 以左氧氟沙星計) ]。 培養(yǎng)基與沖洗液: 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基( FTM，批 號為 20180418) ，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基( TSB，批號為 20180630) ，沙 氏 葡 萄 糖 液 體 培 養(yǎng) 基 ( SDB，批 號 為 180916) ，沙 氏 葡 萄 糖 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 ( SDA，批 號 為 170316) ，0． 1% 蛋白胨水溶液( 批號為 20170602) ，均購 于北京陸橋技術(shù)有限責任公司。

將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌分 別接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，生孢梭菌接種于硫 乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中，35 ℃ 條件下培養(yǎng) 24 h; 將白色 念珠菌接種于沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，25 ℃ 條件下 培養(yǎng) 3 d。上述培養(yǎng)物用無菌 0． 9% 氯化鈉溶液制成適宜 濃度的菌懸液; 將黑曲霉接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 上，25 ℃ 條件下培養(yǎng) 7 d，加入 5 mL 含 0． 05% ( V / V) 聚山梨酯 80 的無菌 0． 9% 氯化鈉溶液，洗脫孢子，收集 孢子懸液，用相同無菌 0． 9% 氯化鈉溶液制成適宜濃 度的孢子懸液。菌液稀釋度及接種量見表 1。

1． 2． 2 無菌方法適用性研究

試驗Ⅰ組: 開啟集菌儀，取供試品 20 支，每支以 0． 1% 蛋白胨水溶液約 10 mL 溶解，取半量導(dǎo)入薄膜過 濾器內(nèi)，用 0． 1%蛋白胨水溶液沖洗濾膜 3 次，每次 100mL， 最后 1 次沖洗過程在濾膜內(nèi)留少量溶液，再分別加菌落 數(shù)小于 100 cfu 的 6 種試驗菌，過濾。每個培養(yǎng)管內(nèi)灌注100 mL 培養(yǎng)基，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽 孢桿菌和生孢梭菌采用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，白色念 珠菌和黑曲霉采用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。硫乙醇酸鹽 流體培養(yǎng)基 35 ℃ 條件下培養(yǎng)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 25 ℃條件下培養(yǎng)，均培養(yǎng) 5 d。

可見，當采用 0． 1% 蛋白胨水溶液沖洗 濾膜 300 mL 時( 試驗Ⅰ組) ，6 種試驗菌均未變渾濁; 沖洗量增至 600 mL 并在沖洗液中添加終體積分數(shù)為 5% 聚山梨酯 80 時( 試驗Ⅳ組) ，白色念珠菌和黑曲霉變 渾濁，其余 4 種細菌始終澄清; 當采用 0． 1% 蛋白胨 水 溶液沖洗濾膜 300 mL 并在最后 1 次沖洗過程添加 2 mL 濃度為 1 mol / L 的 MgSO4 時( 試驗Ⅱ組) ，金黃色 葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲 霉均變渾濁，而大腸埃希菌始終澄清; 即使將 1 mol / L 的 MgSO4 加入量增至 4 mL 時( 試驗Ⅲ組) ，或沖洗次數(shù)增至 6 次時(Ⅴ組)，也未去除甲磺酸左氧氟沙星對大腸 埃希菌的抑菌性; 當采用 0． 1% 蛋白胨水溶液 600 mL 沖洗濾膜并添加 4 mL 濃度為 1 mol / L 的 MgSO4 時( 試 驗Ⅵ組) ，大腸埃希菌變渾濁。因此，可取規(guī)定量供試品， 每支同步以 0． 1% 蛋白胨水溶液約 10 mL 溶解，導(dǎo)入集 菌過濾器內(nèi)，采用薄膜過濾法，用 0． 1% 蛋白胨水溶液 600 mL 沖洗濾膜，最后 1 次沖洗過程在濾膜內(nèi)留少量 溶液，加入 1 mol / L MgSO4 溶液 4 mL，作用 20 min，最后 在培養(yǎng)管內(nèi)加入 100 mL 適宜培養(yǎng)基進行無菌檢查，并 以大腸埃希菌為陽性對照菌。

無菌檢查是有關(guān)藥品安全性的一種定性試驗。 無菌檢查法是針對無菌工藝產(chǎn)品和最終滅菌產(chǎn)品的無 菌性而建立的檢驗法，藥典要求，無菌藥品包括各類注 射用制劑、眼科用制劑及用于手術(shù)、嚴重燒傷、嚴重創(chuàng)傷 等的產(chǎn)品。即進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、植入或埋入肌肉、 皮下組織、與創(chuàng)傷部位接觸的產(chǎn)品、材料、器械及醫(yī)學(xué)使 用上要求無菌的品種，均可按本方法進行無菌檢查。 注射用甲磺酸左氧氟沙星直接進入人體血液循環(huán)，故應(yīng) 對其進行無菌檢查，以確保用藥安全。



 

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