腦水腫是液體在腦細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外間隙的病理 性聚積，通常不是單一原因引起的，多見(jiàn)于顱腦損 傷、腫瘤、炎癥及腦血管疾病等的繼發(fā)改變，也可繼 發(fā)于全身疾病。腦水腫既是腦梗死發(fā)展到一定階段 出現(xiàn)的病理生理改變，同時(shí)也是疾病早期致死的主要原因，亦對(duì)腦梗死的發(fā)生發(fā)展起著重要的促進(jìn)作 用。因此，如何使腦水腫迅速消退、降低顱內(nèi)壓成為 急性腦損傷的主要治療目標(biāo)。

材料與方法

1 藥物與試劑

注射用曲札茋苷( 昆藥集團(tuán)股份有限公司藥物研究院，批號(hào): 170101，規(guī)格: 每支 20 mg) ; 依達(dá)拉奉 注射液( 昆明積大制藥股份有限公司，批號(hào): 170406) ; 甘露醇注射液( 上海百特醫(yī)療用品有限公司，批號(hào): S1704007) ; 丁苯酞氯化鈉注射液( 石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司，批號(hào): 20170109) ; 水合氯醛( 山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，批號(hào): 119957，Cas 號(hào): 302-17-0) ; 脂 多糖( LPS，Sigma 公司，批號(hào): Exp2019 /04) ; 氯化鈉注 射液( 科倫藥業(yè)浙江國(guó)鏡藥業(yè)有限公司，批 號(hào): A160301D1) 。

2 儀器

AＲ224 電子天平［奧豪斯儀器( 上海) 有限公 司，稱量試藥及腦重］; BL 2000 電子天平( 廈門拜倫斯電子科技有限公司，稱量動(dòng)物) ; HG 9245A 電 熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; 量瓶、剪刀、彎鑷、止血鉗、動(dòng)脈夾、秒表( 國(guó)產(chǎn)) ; 直 徑 0． 128 mm 尼龍線( 日本) 。

3 動(dòng)物

SPF 級(jí) ICＲ 小鼠，雄性，5 ～ 7 周齡，體重 20 ～ 30 g， 昆藥集團(tuán)股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室，生產(chǎn)許可證: SCXK( 滇) K2014-0001; 飼養(yǎng)于 IVC 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，溫 度 20 ～ 26 ℃，濕度 40% ～ 70% ，照明 12 h∶ 12 h 明暗 交替，照度 150 ～ 300 lx，噪音≤60 dB，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用 許可證: SYXK( 滇) K2014-0001，發(fā)證單位: 昆明市 科學(xué)技術(shù)局。

4 對(duì)局灶永久性腦缺血小鼠腦含水量的影響

參考 Huang 等的線栓法，選擇 26 ～ 30 g 雄性 ICＲ 小鼠，以 4% 的水合氯醛腹腔注射 ( ip) 麻 醉 ( 400 mg·kg － 1·BW) 后，切開(kāi)右側(cè)頸部皮膚，分離、結(jié) 扎右側(cè)頸總動(dòng)脈近心端及頸外動(dòng)脈，在頸總動(dòng)脈分 叉處的近端 2 ～ 3 mm 處切口，插入直徑為 0． 125 mm 的尼龍線 8 ～ 10 mm，線栓進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈( internal carotid artery，ICA) 、穿過(guò)大腦中動(dòng)脈( middle cerebral artery，MCA) 起始端至大腦前動(dòng)脈近端，阻斷 MCA 的所有血流來(lái)源，結(jié)扎備線并縫合皮膚。假手術(shù)組 除不插線外，其余均同模型組。模型動(dòng)物循環(huán)分為 8 組: 假手術(shù)組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照依達(dá)拉奉 10 mg·kg － 1組、丁苯酞組 8. 3 mg·kg － 1 組、甘露醇 2. 0g·kg － 1組以及曲札茋苷高、中、低劑量( 16，8 和 4 mg·kg － 1 ) 組。于造 模 后 1 h，各組動(dòng)物分別按 20 mL·kg － 1體重尾靜脈注射( iv) 給藥，模型組和假手術(shù) 組給予等體積氯化鈉注射液。保證每組納入合格動(dòng) 物數(shù)為 14 只。給藥后 24 h，每組 1 ～ 11 號(hào)動(dòng)物取腦 稱重，并于 80 ℃干燥恒重，按干濕質(zhì)量法計(jì)算腦含 水率。每組 12 ～ 14 號(hào)動(dòng)物快速取腦，置于 10% 甲醛 溶液中固定后進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。為減小實(shí)驗(yàn)的 系統(tǒng)誤差，造模、分組、給藥、取腦及稱量均平行操作。 腦含水率 = ( 濕腦重 － 干腦恒重) /腦濕 重 × 100% 式( 1) 抑制率 = ( 模型組腦含水量 － 樣品組腦含水 量) / 模型組腦含水量 × 100% 式( 2)

5 對(duì)全腦缺血/再灌注小鼠腦含水量的影響

并加以改良。選擇 24 ～ 28 g 雄性小鼠 96 只，按體重隨機(jī)分為 8 組: 假手術(shù)組、模 型組、陽(yáng)性對(duì)照依達(dá)拉奉 12 mg·kg － 1組、丁苯酞 10 mg·kg － 1組、甘露醇 2． 0 g·kg － 1組以及曲札茋苷 20， 10 和 5 mg·kg － 1組，每組 12 只。各組動(dòng)物每日按 20 mL·kg － 1體重 ip 給藥 1 次，連續(xù) 3 d; 對(duì)照組和模型 組給予等體積氯化鈉注射液。末次給藥前，小鼠以 400 mg·kg － 1水合氯醛 ip 麻醉后，仰位固定，行頸部 正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用微型動(dòng)脈夾同時(shí)夾 閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷血流 5 min，松開(kāi)動(dòng)脈夾使血流 復(fù)灌 10 min，然后再阻斷 5 min，如此反復(fù) 3 次; 假手 術(shù)組只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不阻斷血流。造模完成， 縫合傷口，將小鼠回籠飼養(yǎng)。于造模后 1 h 每組按 劑量腹腔注射行末次給藥，24 h 后脫頸椎處死小鼠， 取腦稱重，按照“4”實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定腦含水量。為減 小系統(tǒng)誤差，造模、給藥、取腦及稱量均平行操作。

6 對(duì)脂多糖致感染性小鼠腦含水量的影響

參考 Alexander 等的方法并加以改良。選 20 ～ 24 g 雄性小鼠 96 只，按體重隨機(jī)分為 8 組: 空 白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照依達(dá)拉奉 12 mg·kg － 1 組、丁苯酞 10 mg·kg － 1組、甘露醇 2． 0 g·kg － 1組以及 曲札茋苷 20，10 和 5 mg·kg － 1組，每組 12 只。各組 動(dòng)物每日按 20 mL·kg － 1體重 ip 給藥 1 次，連續(xù) 3 d。 空白對(duì)照組和模型組給予等體積氯化鈉注射液。末 次給藥前 1 h，除空白對(duì)照組 ip 氯化鈉注射液外，其 余各組均按10 mL·kg － 1體重 ip LPS; 造模1 h 后行末 次給藥。于造模后 6 h，脫頸椎處死小鼠，取腦稱重， 按照“4”試驗(yàn)方法測(cè)定腦含水率。為減小系統(tǒng)誤 差，造模、末次給藥、取腦、干燥及稱量均平行操作。

7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 17． 0 軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 x珋± s 表示。 方差齊時(shí)，組間比較采用 LSD 檢驗(yàn); 方差不齊時(shí)，組 間比較采用 Dunnett's T3 檢驗(yàn)。P ＜ 0． 05 為差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。



結(jié) 果

模型組小鼠腦含水量顯著高于 假手術(shù)組( P ＜ 0． 01) ，表明大腦中動(dòng)脈閉塞后 25 h， 小鼠腦水腫明顯。各給藥組于腦梗死后 1 h 單次 ip 給藥，均能不同程度降低模型小鼠的腦含水量，除曲 札茋苷低劑量組作用接近統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P = 0． 054 1) 外，其余所有給藥組與模型組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差 異( P ＜ 0． 05 或 0． 01) 。各組動(dòng)物死亡率與模型組 相比均無(wú)顯著差異。組織病理學(xué)檢查顯示: 假手術(shù)組腦組織形態(tài)未 見(jiàn)明顯病理改變; 模型組小鼠腦組織可見(jiàn)血管和細(xì) 胞周圍間隙增寬、神經(jīng)細(xì)胞水腫、大量細(xì)胞明顯空泡化( 氣球樣變) 、可見(jiàn)嗜酸性神經(jīng)元及其固縮核等病 理改變; 各給藥組與模型組相比，腦組織病理形態(tài)均 有不同程度的改善。

討 論

腦水腫是液體在腦細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外間隙的病理 性聚積，腦缺血及再灌注引起的腦水腫是影響患者 急性期與亞急性期生存的重要因素。細(xì)胞毒性腦水 腫在缺血性腦卒中時(shí)即刻發(fā)生，是由于急性腦缺血 死亡細(xì)胞釋放的細(xì)胞毒性物質(zhì)引起，繼發(fā)于神經(jīng)元 和膠質(zhì)細(xì)胞腫脹。隨著缺血再灌注損傷的發(fā)展，各 種機(jī)制導(dǎo)致血腦屏障的開(kāi)放或破壞，引起血漿成分 外滲至細(xì)胞外間隙，出現(xiàn)血管源性腦水腫。腦缺血 再灌注后的腦水腫是一種細(xì)胞毒性和血管源性腦水 腫的混合型。大面積腦水腫可致顱內(nèi)壓增高，使 得血管受壓阻塞、管腔變窄，引起腦循環(huán)機(jī)能障礙， 形成缺血、水腫和顱內(nèi)高壓惡性循環(huán)。