荷葉為睡蓮科植物蓮（Nelumbo nuciferea Gaertn）的干 燥葉，來源廣泛，價(jià)格低廉，其含有生物堿、皂苷、黃酮類、 揮發(fā)油等復(fù)雜的化學(xué)成分。味苦、性平，歸肝、脾、胃經(jīng)，具 有清暑化濕、涼血止血的功效，抗氧化、抗病毒和降脂等 生物活性，藥食兩用，在荷葉入藥的制劑中，通常采用 薄層色譜法進(jìn)行鑒別，試驗(yàn)擬對(duì)中獸藥口服液中荷葉鑒別 進(jìn)行質(zhì)量研究，制定產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法 

1.1 主要試劑和儀器

 WFH-203B 型三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公 司）；薄層展開缸；一恒HWS-24 型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒 科學(xué)儀器有限公司）；AUW -120D 型 電 子 天 平 （日 本 島 津）；硅膠 G 薄層板分別購(gòu)于青島海洋化工有限公司、煙臺(tái)德信生物和德國(guó)默克公司；氯仿、丙酮、濃氨等分析純?cè)? 劑購(gòu)于廣州市化學(xué)試劑廠；純凈水，購(gòu)于屈臣氏；荷葉對(duì)照 藥材：批號(hào)：121322-200402，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究 院；中獸藥口服液供試品，實(shí)驗(yàn)室自行研制產(chǎn)品，由荷葉、 甘草等 8 味藥材經(jīng)過一定的工藝制備而成。 

1.2 方法 

1.2.1 薄層色譜方法比較

 方法 1：供試品溶液制備：取供 試品 30 mL，置分液漏斗中，加氨水 10 mL，加三氯甲烷提 取 2 次，每次 40 mL，振搖提取，水浴加熱，分取三氯甲烷 層，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)右掖?1 mL 溶解， 作為供試品溶液。對(duì)照藥材溶液制備：取荷葉對(duì)照藥材 1 g， 加水 100 mL，煎煮 2 次，每次 30 min，合并水提液，濃縮至 約 30 mL，照供試品同法制備，作為對(duì)照藥材溶液。陰性樣 品溶液制備：取除荷葉的其余藥材，經(jīng)加工制備成缺荷葉 的陰性樣品，按“供試品溶液制備”方法制備成陰性樣品溶 液。照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性 樣品溶液各 10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，以氯 仿-乙酸乙酯-甲醇-水 （3∶4∶2∶1）10 ℃以下放置的下層溶 液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘鉍鉀試液。 方法 2：供試品溶液制備：取本品 10 mL，加甲醇 30 mL， 水浴回流 30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?25 mL溶解，用 10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 值至 10，加乙醚 30 mL 振搖提取，分取乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?1 mL 溶解，作 為供試品溶液。對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液制備同方法 1。照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性樣 品溶液各 10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘和劑 的硅膠 G 薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液（9∶1∶0.2）為展 開劑，展開，取出，晾干。置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰。 方法 3：溶液制備同方法 2。照薄層色譜法，吸取供試 品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液各 10 μL，分別點(diǎn) 于同一硅膠 G 薄層板上，以氯仿-丙酮-濃氨試液（6∶2∶0.1）為 展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（365 nm）下檢視。 

1.2.2 耐用性試驗(yàn) 

考察不同溫度、濕度、時(shí)間條件下以 及使用不同品牌 G 薄層板，薄層色譜圖的穩(wěn)定性。供試品 溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶液制備同“1.2.1”。照薄 層色譜法，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性樣品溶 液各 10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，以氯仿-丙 酮-濃氨試液（6∶2∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫 外光燈（365 nm）下檢視。

2 結(jié)果

以室內(nèi)溫度 為 25 ℃，室內(nèi)濕度為 50%。供試品溶液與對(duì)照藥材溶液配 制好后在 0 h 分別在廠家 1、廠家 2、廠家 3 硅膠 G 薄層 板點(diǎn)樣，結(jié)果表明，使用不同廠家的硅膠 G 薄層板，對(duì)照 品溶液和供試品溶液斑點(diǎn)展開效果好，Rf 值適中，主斑點(diǎn) 清晰，無(wú)顯著性影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在 0 h、8 h、24 h 不同時(shí)間 點(diǎn)樣，對(duì)照品溶液和供試品溶液斑點(diǎn)展開效果好，Rf 值適 中，主斑點(diǎn)清晰，無(wú)顯著性影響，說明制定的方法在配制好 的樣品在 24 h 內(nèi)點(diǎn)樣，不影響結(jié)果。以青島海洋化工 制造的硅膠 G 薄層板為固定相，室內(nèi)濕度為 50%，供試品 溶液與對(duì)照品溶液配制好后在 0 h 點(diǎn)樣，分別在室溫 25 ℃、 室溫 30 ℃、冰箱 4 ℃進(jìn)行展開，結(jié)果表明，對(duì)照品溶液和 供試品溶液斑點(diǎn)展開效果好，Rf 值適中，主斑點(diǎn)清晰，無(wú) 顯著性影響。

3 討論 

關(guān)于荷葉薄層色譜鑒別的研究相對(duì)較少，《中 華 人 民共和國(guó)獸藥典》2015 年版荷葉項(xiàng)下無(wú)荷葉薄層色譜鑒別，《中華人民共和國(guó)藥典》2015 年版荷丹片和荷葉丸均 以荷葉堿作為對(duì)照品進(jìn)行薄層色譜鑒別。試驗(yàn)參考阮時(shí) 寶等和田宏等建立的中藥制劑中荷葉薄層色譜鑒別方 法，對(duì)研制的中獸藥口服液中的荷葉進(jìn)行質(zhì)量研究。試驗(yàn) 結(jié)果顯示，制定的薄層色譜鑒別方法清晰可見，分離度好 且陰性無(wú)干擾，穩(wěn)定性好，對(duì)荷葉項(xiàng)能進(jìn)行較好的質(zhì)量控制。

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