1 主要試劑與儀器
痤瘡丙酸桿菌(Propionibacterium acnes,P. ac- nes,BNCC 336649) 購自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)有限公 司;金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. au- reus,ATCC 25923) 購自廣東省微生物菌種保藏中 心;黃芩片(批號(hào) 190102)購自河北安國市譽(yù)林藥業(yè) 有限公司;葡萄糖酸鋅(純度 99% 批號(hào) 20170412) 購自河南雅輝化工產(chǎn)品有限公司;硫酸慶大霉素注 射液(批號(hào) 20170710)購自天津金耀藥業(yè)有限公司; 頭孢氨芐(批號(hào) 170301)購自天津市中央藥業(yè)有限公司;LB 肉湯購自北京索萊寶科技有限公司;改良 GAM 培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均購自山東拓普生物 工程有限公司;厭氧產(chǎn)氣袋、厭氧培養(yǎng)袋(日本三菱 瓦斯化學(xué)株式會(huì)社);HCB-900V 垂直層流潔凈工作 臺(tái)(青島海爾特種電器有限公司);生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司);ZWY-240 恒溫培養(yǎng)振 蕩器(上海智誠分析儀器制造有限公司);LS-B50L 立式壓力蒸汽滅菌器(上海醫(yī)用核子儀器廠);infi- nite200 全波長酶標(biāo)儀(美國帝肯 TECAN 公司)。
2 方法
分別配制硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、改 良 GAM 培養(yǎng)基、LB 肉湯和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,將配 制好的培養(yǎng)基置錐形瓶中密封,放入滅菌鍋中于 121 ℃下滅菌 30 min,待冷卻后,置于 4 ℃冰箱中保 存?zhèn)溆?。?100 μL 金黃色葡萄球菌甘油 凍存液于 10 mL LB 肉湯中,在 37 ℃、150 r/min 的條 件下置于恒溫振蕩器中培養(yǎng) 16 h 進(jìn)行活化,隨后采 用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),使用前用 LB 肉湯稀 釋;取 100 μL 痤瘡丙酸桿菌甘油凍存液于 5 mL 硫 乙醇酸鹽培養(yǎng)基中,在 37 ℃條件下厭氧培養(yǎng) 48 h 進(jìn)行活化,隨后采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),使 用前用改良 GAM 肉湯稀釋。
3 結(jié)果
黃芩與葡萄糖酸鋅聯(lián)用后對金黃色葡萄球菌 的抑菌活性與黃芩單用相比顯著增強(qiáng)(P<0.01),而 與葡萄糖酸鋅單用相比無明顯差異(P>0.05);聯(lián)合 用藥對痤瘡丙酸桿菌的抑菌活性與兩藥單獨(dú)使用 相比均顯著增強(qiáng)(P<0.01)。生長率>20% 標(biāo)記為黑色,生長率≤20%標(biāo)記為灰色,結(jié)果顯示在 1/8 MIC 黃芩-1/8 MIC 葡萄糖酸鋅、1/4 MIC 黃芩1/8 MIC 葡萄糖酸鋅、1/8 MIC 黃芩-1/4 MIC 葡萄糖 酸鋅、1/4 MIC 黃芩-1/4 MIC 葡萄糖酸鋅作用下,聯(lián) 合用藥開始表現(xiàn)明顯的抑菌作用。
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