材料與方法

LX-100 手掌型離心機(jī)（江蘇海林市其林貝爾儀器制造有限公司）；2-16PK 型高速臺(tái)式離心機(jī)（SIG－ MA 公司）；PCR 儀（TaKaRa）；YP202N 電子天平（上 海精密科學(xué)儀器有限公司）；DYY-6C 型電泳儀（北京 市六一儀器廠）；微波爐（青島海爾制品有限公司）電 泳槽（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）；Hws24 電熱 恒溫水浴鍋 （上海一恒儀器有限公司）Gel Doc 2 000 紫外凝膠成像分析系統(tǒng)（美國(guó) Bio-RAD）。Ex Taq DNA 聚合酶、Ex Taq Buffer、DNA Marker （2 000）、DNA 提取試劑盒 （TIANamp Genomic DNA Kit）、超凈水、引物、核酸電泳緩沖液（TAE）、6×Load－ ing Buffer、瓊脂糖（AGAROSE G-10）、dNTP Mixture、 溴化乙錠（EB）。

結(jié)果

目前用于構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的基因，以線粒體 pcox1 和核糖體 ITS1、ITS2 基因應(yīng)用最為廣泛。其 中，在使用 pcox1 基因作為分子標(biāo)記時(shí)范圍沒(méi)有核糖 體 ITS1、ITS2 基因那么廣。pcox1 和 ITS 都擁有高度 的保守性，但 pcox1 基因的特點(diǎn)為種內(nèi)分化弱，種間 分化強(qiáng)，而 rDNA 序列功能上具有進(jìn)化時(shí)鐘性，目前 已經(jīng)被應(yīng)用到物種分類與進(jìn)化分析中，尤其是種間 的分類。ITS 進(jìn)化快，物種內(nèi)發(fā)生變異的幾率小， 物種間發(fā)生變異的幾率大。通過(guò)分析 ITS 序列可以 構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)并分析其親緣關(guān)系。但是實(shí)驗(yàn)由于基因 庫(kù)中沒(méi)有片形褶皺絳蟲(chóng)的 pcox1 基因，所以用 pcox1 作為目的基因只鑒定了該未知蟲(chóng)體的屬，而無(wú)法確 定鑒定該絳蟲(chóng)具體是什么，而基因庫(kù)中有片形褶皺 絳蟲(chóng) ITS 的序列，所以我們可以確切的證明未知絳蟲(chóng) 為片形褶皺絳蟲(chóng)。

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