材料與方法
精密 pH 計 ( 酸度計) ,意大利哈納; JM 85A 型 膠體磨,山東省萊州市順通膠體磨廠; DM-2100AⅢ 自分渣 磨 漿 機,河 北 滄 州 鐵 獅 磨 漿 機 械 有 限 公 司;HH—6 電熱 恒 溫 水 浴 鍋,河南智誠科技發(fā)展公司; YB881—4 電熱恒溫鼓風干燥箱,蘇州豪順自動化設(shè) 備有限公司; DPH-9012 /9032 型電熱恒溫培養(yǎng)箱,上 海一恒; BYC—A 電子計重天平,深圳市博佳電子儀 器有限公司; 79-1 磁力加熱攪拌器,金壇市富華儀 器有限公司。采用正交實驗方法,以水解度為測定指標,考察 復(fù)合酶比例 ( A) 、反應(yīng) pH 值 ( B) 、反應(yīng)溫度 ( C) 和反應(yīng)時間 ( D) 4 個因素對水解度的影響。以水解度為測定指標,考察其各自的蛋 白酶用量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間和反應(yīng) pH 值 4 個因 素對水解度的影響,確定可控因素的最佳范圍。
結(jié)果與討論
隨反應(yīng)溫度的增加,在 55℃ 時 DH 最高。溫度對酶促反應(yīng)的影響有 2 個方面,溫度 提高可使反應(yīng)速度加快,隨著溫度的提高,酶失活速 度也開始加快。因此,適宜反應(yīng)溫度為 55℃。隨著反應(yīng)時間的逐漸增 加, DH 呈上升趨勢,在反應(yīng) 4h 時 DH 最高。隨著時間的 延長,水解度的上升趨勢應(yīng)該趨于平緩,而圖中顯示 有下降趨勢,主要原因可能是水解液水解時間過長, 多肽分子進一步分解,影響了水解度的測定。綜 合考慮,適宜反應(yīng)時間為 4h。量取 100mL 的大豆蛋白液 5 份,調(diào) pH 分 別 為 6. 0、6. 5、7. 0、7. 5、8. 0,均加入 9000U·g -1 木瓜蛋 白酶,在 55℃ 下分別反應(yīng) 3h 后,終止酶解反應(yīng),測 定水解度。隨 pH 的增加,DH 呈上 升趨勢,在 pH 至 6. 5 時 DH 開始下降。由于 pH 過 高、過低都會影響酶促反應(yīng),水解度最大時即為最佳 pH。因此,最適 pH 為 6. 5。
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