嘔吐毒素是主要由鐮刀菌屬（Fusarium） 產(chǎn)生的 一種 B 型單端孢霉烯族真菌毒素， 廣泛存在于小 麥、 大麥和玉米等糧谷類食品中， 是主要真菌 性毒素污染物之一， 對(duì)人體的危害主要表現(xiàn)為惡 心、腹瀉、嘔吐等急性癥狀， 侵害機(jī)體免疫系統(tǒng)， 歐盟分類標(biāo)準(zhǔn)為三級(jí)致癌物。 當(dāng)前， 全球有 30 余個(gè)國(guó)家針對(duì)食品或谷物中的嘔吐毒素制定了相關(guān) 限量標(biāo)準(zhǔn)， 我國(guó) GB 2761－2017規(guī)定了谷物及谷 物制品中嘔吐毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)為 1.0 mg/kg。 GB 5009.111－2016中規(guī)定了嘔吐毒素的檢測(cè)方法有 同位素稀釋液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法、 免疫親和層析 凈化高效液相色譜法、 薄層色譜測(cè)定法、 酶聯(lián)免疫 吸附篩查法。

一、 實(shí)驗(yàn)部分 

（一） 材料、 試劑與儀器

 嘔吐毒素免疫親和 柱 （Romer Labs， MO， USA）； 脫氧雪腐鐮刀菌烯（嘔吐毒素） 標(biāo)準(zhǔn)品 （純度>99％， Pribolab Pte. Ltd.Singapore） ； 甲 醇 （ 色 譜 純 ， SCHARLAB S L）； 乙醇 （分析純， 西隴科學(xué)股份有限公司）； NY 針頭式過(guò)濾器（WondaDisc Ⅱ，SHIMADZU-GL）； 磷 酸緩沖液 （10 mM， pH 7.4， Sigma）。 本次評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)使用的嘔吐毒素快速檢測(cè)試紙 條 / 卡， 采取網(wǎng)上咨詢， 選擇 4 家知名度較高的公 司的快檢產(chǎn)品， 為避免評(píng)價(jià)結(jié)果對(duì)生產(chǎn)廠家造成影 響， 對(duì)快檢產(chǎn)品進(jìn)行了編序， 分別為 A、 B、 C、 D 公司。 高效液相色譜儀 （Agilent Technologies）； C18 色譜柱 （Analytical 4.6×150mm 5-Micron， Agilent Technologies） ； Milli-Q 超 純 水 處 理 系 統(tǒng) （ 美 國(guó) Millipore）； 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 （一恒DHG-9420A， 上海一恒科學(xué)儀器有限公司）； 電子天平 （QUINTIX213-1CN， 賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）； 組織 粉碎機(jī) （JYL-C16V， 九陽(yáng)股份有限公司）； 震蕩器 （MMV-1000W， 上海愛朗儀器有限公司）。 

（二） 嘔吐毒素添加回收實(shí)驗(yàn)

 為確保儀器檢 驗(yàn)盲樣均勻性實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度， 在盲樣制備實(shí)驗(yàn)之前 先做嘔吐毒素添加回收實(shí)驗(yàn)。 具體步驟為：（1） 選 取未檢出嘔吐毒素的大米， 經(jīng)組織粉碎機(jī)研磨后過(guò) 篩 （0.6 mm）， 收集大米粉；（2） 制備 9 個(gè)樣品， 平 均分成 3 組。 每組樣品中添加嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品， 終 濃度分別為 0.5、 0.8、 1.0 mg/kg；（3） 以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB 5009.111－2016的第二法： 免疫親和層析凈 化高效液相色譜法對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)， 并計(jì)量樣 品的添加回收率。 （三） 盲樣制備 根據(jù) 《食品快速檢測(cè)方法評(píng) 價(jià)技術(shù)規(guī)范》的要求， 本次評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)所用盲樣選 擇大米粉作為基質(zhì)。 該規(guī)范同時(shí)對(duì)測(cè)試水平的設(shè)置 提出了要求， 測(cè)試水平一般應(yīng)包括食品基質(zhì)空白樣 品， 標(biāo)準(zhǔn)方法檢出水平 （或者標(biāo)準(zhǔn)限量值） 的 0.5、 1、 2 倍水平或者其他可檢測(cè)區(qū)分的水平 （不少于 3 個(gè)）， 或者方法標(biāo)稱檢出限 0.5、 1、 2 倍水平或者 其他可檢測(cè)區(qū)分的水平 （不少于 3 個(gè)）。 根據(jù)膠體 金免疫層析法的特性， 本次評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)設(shè)置 4 個(gè)測(cè)試 水平， 分別為 0 mg/kg （空白樣品）、 0.5 mg/kg （陰 性樣品 1） 、 0.8 mg/kg （陰 性 樣 品 2） 、 1.0 mg/kg （陽(yáng)性樣品 1）。

二、 結(jié)果與討論 

（一） 添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

為保證儀器分析方 法的科學(xué)性， 在開展評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)前， 先驗(yàn)證嘔吐毒素 在大米粉基質(zhì)中的添加回收率， 結(jié)果見表 1。

（二） 均勻性檢驗(yàn)結(jié)果 

按照 CNAS－GL003： 2018 對(duì)樣品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證。 首先對(duì) 各濃度水平的盲樣進(jìn)行檢測(cè)， 3 個(gè)濃度水平的回收 率分別為 91.2％、 104.5％、 102％ 。 然 后， 采用單因素方差分析法 （F －檢驗(yàn)） 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn) 行統(tǒng)計(jì)分析， 組間自由度為 5， 組內(nèi)自由度為 12， 查看 GB/T 15000.5－1994的附錄 B “F 檢驗(yàn)法臨 界值表”， F0.05（5，12）＝3.11， SPSS 軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié) 果的 F 值分別為 2.68、 2.95、 0.76， 對(duì)應(yīng)的 P 值分 別為 0.075、 0.058、 0.597 。 3 組濃度水平 的 F 值均0.05， 結(jié)果表明， 在 顯著水平 α＝0.05 時(shí)， 同一濃度水平的所有樣品間 無(wú)顯著性差異， 即制備的樣品是均勻的。 

（三） 樣品的穩(wěn)定性檢驗(yàn) 

將不同儲(chǔ)存時(shí)間樣 品的檢測(cè)平均值與初始檢測(cè)平均值進(jìn)行一致性比 較， 按照 CNAS－GL003： 2018中穩(wěn)定性檢驗(yàn)的 要求， 采用 t 檢驗(yàn)法 “二個(gè)平均值之間的一致性” 公式計(jì) 算 t 值 。 查 GB/T 15000.5－ 1994 的附錄 F “T 檢驗(yàn)法分位數(shù)表”，t 0.05 （22）＝ 2.07， 計(jì)算的 t 值分別是 4.03、 4.71、 6.61， 所有 t 值均> t0.05 （22） ＝2.07， 表明各儲(chǔ)存時(shí)間的檢測(cè)結(jié) 果與初始檢測(cè)結(jié)果之間存在顯著性差異。 隨著儲(chǔ)存 時(shí)間的延長(zhǎng)， t 值逐漸增大， 表明儲(chǔ)存時(shí)間越長(zhǎng)， 嘔吐毒素的檢測(cè)值變化越大， 在 1 周時(shí)間內(nèi)， 檢測(cè)值僅相差 0.075。 本研究制備的樣品， 在 1 周時(shí)間 內(nèi)完成對(duì)嘔吐毒素快檢產(chǎn)品的評(píng)價(jià)， 對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果不 會(huì)造成顯著影響。

三、 結(jié)論 

采用空白大米粉基質(zhì)加標(biāo)的方法制備 4 種不同濃度水平的嘔吐毒素樣品， 對(duì) 4 個(gè)不同廠家 的膠體金免疫層析試紙條 / 卡進(jìn)行評(píng)價(jià)測(cè)試。 根據(jù) 評(píng)價(jià)結(jié)果可知， 樣品的添加回收率較高， 制備的盲 樣均勻性良好， 快檢產(chǎn)品的包裝、 說(shuō)明書、 試劑和 配備器具等完好， 產(chǎn)品的檢測(cè)限符合標(biāo)準(zhǔn)要求， 現(xiàn) 場(chǎng)使用的適用性良好。 產(chǎn)品的假陰性率均為 0％， 假陽(yáng)性率≥33％， 不符合快檢方法指標(biāo)的要求， 此 結(jié)果與膠體金免疫層析法的固有特點(diǎn)有關(guān)。 另外， 本研究發(fā)現(xiàn)樣品濃度水平設(shè)置是決定評(píng)價(jià)結(jié)果的關(guān) 鍵因素， 快檢行業(yè)亟需制定一套公認(rèn)的、 科學(xué)合理 的評(píng)價(jià)方法。

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