1 材料與方法
窖泥樣品:取自川南某白酒廠3個(gè)同期建造車間中的 9口窖池,且窖池連續(xù)生產(chǎn)10年以上,取樣部位為每口窖底 中心部位,取得窖泥樣品后將其編號為1~9,其中1~3、 4~6、8~9為分別同一車間不同窖池窖泥。DK-S28恒溫水浴鍋:上海一恒科學(xué)儀器有限公司; SORVALL Stratos高速冷凍離心機(jī)、Thermo 900超低溫冰箱: 美國Thermo Scientific公司;TGL-16G臺(tái)式高速離心機(jī):上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司;Minisubcell水平電泳儀、GelDoc 2000凝膠成像系統(tǒng)、MyCycler PCR儀:美國Bio-Rad公司;D-160均質(zhì)機(jī):美國Scilogex公司;GS junior高通量測序儀: 美國Roche公司;Cary Eclipse熒光分光光度計(jì):安捷倫科技 (中國)有限公司。
2 結(jié)果與分析
以9個(gè)窖泥樣品的DNA為模板,采用帶有特殊標(biāo)簽的 引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后,以其為模板進(jìn) 行emPCR擴(kuò)增,emPCR擴(kuò)增產(chǎn)物堿基長度在450 bp左右。 采用高通量測序技術(shù)對emPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序,通過標(biāo) 簽信息區(qū)分不同樣品。本次測序共獲得298 405條序列,序 列堿基平均長度為321 bp,大部分序列的堿基長度集中在450 bp左右,序列堿基長度與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)堿基長度基本一致。經(jīng)過Cope V1.2.3.3 軟件篩選過濾掉低質(zhì)量序列和重復(fù)序列,最終獲得有效序 列66 322條,有效序列的堿基長度在450 bp左右。
3 結(jié)論
主要通過高通量測序法分析了濃香型白酒不 同窖泥樣品中的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)。通過高通量測序共獲得 66 322條有效序列,2 050個(gè)OTU。其中窖泥樣品1、2、3平均 獲得351個(gè)OTU,窖泥樣品4、5、6平均獲得214個(gè)OTU,窖泥 樣品7、8、9平均獲得153個(gè)OTU。根據(jù)OTU,9個(gè)不同窖泥 樣品中共分為9個(gè)門類,其中窖泥樣品1、2、3中共有6個(gè)門 類,窖泥樣品4、5、6中共有9個(gè)門類,窖泥樣品7、8、9中共有 8個(gè)門類。
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