微生物限度檢查是保證藥品安全性的重要環(huán) 節(jié)，采用通過方法適用性試驗(yàn)的檢查方法是獲得可 靠結(jié)果的基本保證。復(fù)方氯霉素搽劑、復(fù) 方 苯 甲 酸搽劑、水楊酸搽劑、復(fù)方呋喃西林滴鼻液、苯酚甘 油滴耳液和硼酸滴耳液均是醫(yī)院制劑中常見的外用 給藥制劑，６種 制 劑 均 有 不 同 程 度 的 抑 菌 性。中 國藥 典２０１５年 版 規(guī) 定，應(yīng)先消除供試品的抑菌活 性，再依法進(jìn)行檢查。

１ 儀器與試劑

１．１ 儀器

ＡＥ２４０ 精 密 電 子 天 平 （瑞 士 ＭＥＴＴＬＥＲ 公 司）；ＨＷＳ２４型電熱恒溫水浴鍋、ＤＨＧ－９１４５Ａ 電熱 恒溫鼓風(fēng)干燥箱、GHP-9160隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）；ＹＰ３００１ＮＤ電子天平（上海 精科有限 公 司）；ＭＪＰＳ－１５０型 霉 菌 培 養(yǎng) 箱（上 海 精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；ＷＪ－６無菌檢查儀（天津市 羅根科技 有 限 公 司）；ＳＷ－ＣＪ－１Ｂ 凈 化 工 作 臺（蘇 州 太倉凈 化 設(shè) 備 廠）；ＬＤＺＸ－４０ＫＢＳ立 式 壓 力 蒸 汽 滅 菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）。

１．２ 試藥

復(fù) 方 氯 霉 素 搽 劑 （批 號：１８０５２８、１８０７２７、 １８１１１４）、復(fù)方苯甲酸搽劑 （批 號：１８０３１４、１８０６１５、 １８０９２５）、水 楊 酸 搽 劑 （批 號：１８０５２４、１８０７０６、 １８０８２１）、復(fù) 方 呋 喃 西 林 滴 鼻 液 （批 號：１８０３２０、 １８０７１８、１８０９０５）、苯酚甘油滴耳液 （批 號：１８０５０９、 １８０７１１、１８１１０５）和 硼 酸 滴 耳 液 （批 號：１８０６２２、 １８０７２６、１８１２１３），均由聯(lián)勤保障部隊(duì)９００醫(yī)院制備。

１．３ 培養(yǎng)基、稀釋液和沖洗液

培 養(yǎng) 基：胰 酪 大 豆 胨 液 體 培 養(yǎng) 基 （批 號： １６１２０７１）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號：１６１０２５２）、 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（批號：１６０９２１４）、沙氏葡萄 糖液體培養(yǎng)基（批號：１６１１１６２）、甘露醇氯化鈉瓊脂 培養(yǎng)基（批號：１７０３２０２）、溴化十六烷基三甲胺瓊脂 培養(yǎng) 基（批 號：１６０３０９）、麥 康 凱 液 體 培 養(yǎng) 基（批 號： １７０３２０）、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（批號：１６０８２６）；稀釋液 及沖洗液：ｐＨ ７．０ 無 菌 氯 化 鈉－蛋 白 胨 緩 沖 液 （批 號：１７０９０６２）。均購自北京三藥科技開發(fā)公司。

１．４ 菌株

金 黃 色 葡 萄 球 菌 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ） ［ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３］、枯 草 芽 孢 桿 菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉ－ ｌｉｓ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０１］、銅 綠 假 單 胞 菌 （Ｐｓｅｕｄｏ－ ｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）１０１０４］、白 色 念 珠 菌 （Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００１］、黑 曲 霉 （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００３］，大 腸 埃 希 菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２］以上菌株均 為第３代，均購自福建省藥檢所。

１．５ 微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

復(fù)方氯霉素搽劑、復(fù)方苯甲酸搽劑和水楊酸搽 劑為皮膚給藥制劑；酚甘油滴耳液和硼酸滴耳液為 耳用制劑；復(fù)方呋喃西林滴鼻液為鼻用制劑。皮膚 給藥制劑和耳用制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)如下：需氧 菌總數(shù)不超過１００ｃｆｕ／ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ 可接受的最 大菌數(shù) 為２００），霉 菌 和 酵 母 菌 總 數(shù) 不 超 過１０ｃｆｕ／ ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ可接受的最大菌數(shù)為２０），不得檢出 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞 菌（１ｍｌ）。鼻 用 制 劑的微生物限 度 標(biāo) 準(zhǔn) 如 下：需 氧 菌 總 數(shù) 不 超 過１００ ｃｆｕ／ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ可接受的最大菌數(shù)為２００），霉菌 和酵母菌總數(shù)不超過１０ｃｆｕ／ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ可接受的最大菌數(shù)為２０），不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡 萄球菌、銅綠假單胞菌（１ｍｌ）。

２ 方法與結(jié)果

取經(jīng)（３０～３５）℃培 養(yǎng)１８～２４ｈ的 金 黃 色 葡 萄 球菌、枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌的胰酪大豆胨 液體培養(yǎng)物和經(jīng)（２０～２５）℃培養(yǎng)２４～４８ｈ的 白 色 念珠菌 沙 氏 葡 萄 糖 液 體 培 養(yǎng) 物 １ ｍｌ，加 ９ ｍｌｐＨ ７．０的氯化鈉－蛋白胨緩沖液，１０倍遞增 稀 釋，制 成 適宜濃度的菌懸液。 取經(jīng)（２０～２５）℃培養(yǎng)７ｄ的黑曲霉沙氏葡萄糖 瓊脂斜面培養(yǎng)物，加５ｍｌ含０．０５％（ｍｌ／ｍｌ）聚山梨 酯８０的ｐＨ７．０的氯化鈉－蛋白胨緩沖液，將孢子洗 脫，并將孢子過濾至無菌試管內(nèi)，取孢 子 液１ｍｌ用 含０．０５％（ｍｌ／ｍｌ）聚 山 梨 酯８０的 ｐＨ７．０氯 化 鈉－ 蛋白胨緩沖 液１０ 倍 遞 增 稀 釋，制 成 適 宜 濃 度 的 菌 懸液。６種樣品分別在供試液制備環(huán)節(jié)和供試液經(jīng)過處理后（薄膜過濾法最后一次沖洗液中）加菌，進(jìn)行 回收比值的測定，結(jié)果見表１。加菌方式欄中 Ａ 代 表在供試液制備環(huán)節(jié)加菌可使各試驗(yàn)菌種的回收比 值均在０．５～２范圍內(nèi)，Ｂ代表在供試液經(jīng)過處理后 加菌可使各試驗(yàn)菌種的回收比值均在０．５～２范圍 內(nèi)。除了復(fù)方苯甲酸搽劑，其余５種樣品運(yùn)用同一 種方法在兩種加菌環(huán)節(jié)進(jìn)行測定，試驗(yàn)菌種的回收 比值均在０．５～２范圍內(nèi)，加菌順序?qū)Y(jié)果不會產(chǎn)生 影響。復(fù)方苯甲酸搽劑經(jīng)薄膜過濾法處理后，在最 后一次沖洗液中加菌，微生物計(jì)數(shù)方法為１∶１０供 試液（每膜１０ｍｌ），沖洗量每膜７００ｍｌ，將加菌順序 前移至供試液制備環(huán)節(jié)，需增加供試液的稀釋倍數(shù)， 微生物計(jì)數(shù)方 法 為１∶２０供 試 液（每 膜１０ｍｌ），沖 洗量每膜３００ｍｌ。結(jié)果表明，雖然６種樣品都有一 定的抑菌作用，但是加菌順序?qū)Γ斗N樣品的影響不 大，最終均選擇更為科學(xué)合理的加菌方式———供 試 液制備環(huán)節(jié)加菌。

３ 討論

醫(yī)院制劑是醫(yī)院臨床用藥不可或缺的部分，由 于醫(yī)院制劑主要在本院臨床中使用，生產(chǎn)規(guī)模一般 不大，設(shè)備相 對 簡 單，制劑質(zhì)量易存在不穩(wěn)定的風(fēng) 險(xiǎn)，因此需嚴(yán)格按照２０１５版《中國藥典》的規(guī)定，進(jìn) 行微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)，保證制劑質(zhì)量 的安全可控。２０１５版《中國藥典》微生物限度檢 查方法適用性試驗(yàn)與 ＵＳＰ等國際方案趨向一致，更 為科學(xué)有效。



 

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