1 儀器與材料 

1．1 儀器 

HFsafe － 1800TE Ⅱ型 B2 生物安全柜( 上海力申科 學(xué)儀器有限公司) ; LDZX － 80KCS 型壓力蒸汽滅菌器， LDZX － 30KCS 型壓力蒸汽滅菌器，均購自上海申安醫(yī) 療器械廠; BSD － TX345 型臺式恒溫振蕩器( 上海博訊 實業(yè)有限公司) ; XY500JC 型電子天平( 常州市幸運電子 設(shè)備有限公司) ; HH － 系列電熱恒溫水浴鍋( 北京科偉永 興儀器有限公司) ; MJ 250FI 型霉菌培養(yǎng)箱，LRH － 250F 型生化培養(yǎng)箱，均購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司; VORTEX － 5 型渦旋混合器( 海門市其林貝爾儀器制造 有限公司) ; Midi Plus 移液器( 德國賽多利斯公司) ; FC752 型薄膜過濾器( 杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司) 。 

1．2 試藥 

碘甘油( 規(guī)格為 1% ，每瓶 20 mL，批號為 170302， 某制藥公司) ; 氯化鈉( 天津市百世化工有限公司，批號 為 20150309) 。 

1．3 菌種 

銅 綠 假 單 胞 菌 Pseudomonas aeruginosa〔CMCC( B) 10104〕，金 黃 色 葡 萄 球 菌 Staphylococcus aureus 〔CMCC ( B) 26003〕，枯 草 芽 孢 桿 菌 Bacillus subtilis 〔CMCC( B) 63501〕，白 色 念 珠 菌 Candida albicans 〔CMCC( F) 98001〕，黑曲霉 Aspergillus nige〔r CMCC( F) 98003〕，大腸 埃希菌 Escherichia col〔i CMCC( B) 44102〕，均由中國食 品藥品檢定研究院提供，工作用菌株為第 3 代。

1．4 培養(yǎng)基及試劑 

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基( 批號為 1702042) ，胰酪大 豆胨液體培養(yǎng)基( 批號為 1703102) ，沙氏葡萄糖瓊脂培 養(yǎng)基( 批號為 1704064) ，沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基( 批號 為 150914) ，pH 7． 0 氯 化 鈉 蛋 白 胨 緩 沖 液 ( 批 號 為 1702242) ，蛋白胨培養(yǎng)基( 批號為 170208) ，麥康凱瓊脂 培養(yǎng)基( 批號為 161213) ，甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基( 批 號為 160112) ，麥康凱液體培養(yǎng)基( 批號為 1612222) ，溴 化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基( 批號為 170103) ，均由 北京三藥科技開發(fā)公司提供，培養(yǎng)基適用性檢查均符合 2015 年版《中國藥典》要求。 

2 方法與結(jié)果 

2．1 菌液制備 

在生物安全柜中操作，將銅綠假單胞菌、金黃色葡 萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌置 50 mL 胰酪大豆 胨液體培養(yǎng)基中，于 30 ～ 35 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 ～ 24 h; 將白色念珠菌接種至 50 mL 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中， 于 20 ～ 25℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2 ～ 3 d; 上述新鮮培養(yǎng)物用 無菌 0． 9% 氯化鈉溶液稀釋成適宜濃度的菌懸液，等待 接種。將黑曲霉接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上， 于 20 ～ 25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 7 d 或直至產(chǎn)生豐富的孢子， 加入少量含 0． 05% ( L / L) 聚山梨酯 80 的無菌 0． 9% 氯 化鈉溶液，洗脫孢子，也可借助無菌長柄棉簽輕輕擦 拭孢子，收集孢子懸液; 用含 0． 05% ( L / L) 聚山梨酯 80 的無菌 0． 9% 氯化鈉溶液將黑曲霉稀釋成適宜濃度 的孢子懸液，等待接種。 

2．2 供試液制備 

取供試品 10 mL，加入 pH 7． 0 氯化鈉蛋白胨緩沖 液至 100 mL，45 ℃ 恒溫振蕩 15 min，制成 1 ∶ 10 的供試 液 A。取 1 ∶ 10 供試液 A 20 mL，加入 80 mL pH 7． 0 氯化 鈉蛋白胨緩沖液，混勻，制成 1 ∶ 50 的供試液 B。 

2．3 微生物計數(shù)方法適用性試驗 

1) 平皿法。試驗組: 取 2． 2 項下供試液 A，B 分別置 5 個無菌試管中，每管裝量 9． 9 mL，再分別加入 2． 1 項 下稀釋好的含菌量為 103 ～ 104 cfu / mL 的銅綠假單胞 菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲 霉試驗菌液 0． 1 mL; 供試品對照組: 取稀釋好的供試液，以稀釋液代替菌液，同試驗組操作; 菌液對照組: 取 相應(yīng)稀釋液替代供試液，同試驗組操作。

3 討論 

碘甘油中的甘油在制劑中除了有助溶、矯味、增稠 多種作用外，還有抗菌防腐作用。碘除作治療藥和其他方 面的用途外，在碘甘油藥劑中主要用作殺菌消毒劑和抑 菌防腐劑，所以碘甘油對銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球 菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉都有一定抑菌作 用。通過稀釋法( 1 ∶ 50) 也不能完全消除對 5 種菌的 抑制，采用薄膜過濾法可高效地消除碘甘油的抑菌性。故 對于碘甘油的微生物限度檢查，首先建立方法適用性試 驗時應(yīng)消除碘甘油中的抑菌作用，以免出現(xiàn)假陰性。消除制劑的抑菌性，一般的試驗順序是稀釋法、含中和劑的 稀釋法、薄膜過濾法、含中和劑的薄膜過濾法。

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