股骨頭壞死是骨科領(lǐng)域常見(jiàn)的難治性疾病，有 “輕則 殘疾，重則癱瘓”的說(shuō)法，近年來(lái)隨著人們生活方式的 改變、交通事故的增加、激素的濫用，其發(fā)病率逐年上升， 嚴(yán)重影響 患 者 生 活。中醫(yī)將股骨頭壞死歸屬為 “骨 蝕” “骨疹”“骨痹”的范疇，大多采用補(bǔ)腎、健骨、活血、行 氣、疏經(jīng)等方法進(jìn)行治療。

1 材料 

1. 1 儀器 

JJ500 型電子天平 ( 常熟市雙杰測(cè)試儀器廠) ; JP-300A 型高速多功能粉碎機(jī) ( 永康市久品工貿(mào)有限公 司) ; DC-NSG-30 型多功能提取罐 ( 上海達(dá)程實(shí)驗(yàn)設(shè)備有 限公司) ; 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 德國(guó) Heidolph 公司) ; DZF-6050 型 真空干燥箱 ( 上海一恒科技有限公司) ; JJ3000 型動(dòng)物電 子秤 ( 香港 G＆G 有限公司) ; BS224S 型電子天平 ( 萬(wàn)分之 一，德國(guó) Sartorius 公司) ; 3K30 型離心機(jī) ( 美國(guó) Sigma 公司) ; 全自動(dòng)血液流變儀 ( 北京普利生儀器有限公司) 。

1. 2 試藥

必理通 ( 中美天津史克制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn) 字 H12021118，0. 5 g /片) ; 通絡(luò)生骨膠囊 ( 浙江海正藥業(yè) 股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 Z20040001) ; 鹽酸腎上腺素注射 液 ( 廣州白云山明興制藥有限公司，批號(hào) 101001) 。內(nèi)毒 素 ( LPS) ( 美國(guó) Sigma 公司，批號(hào) L2880) ; 甲強(qiáng)龍 ( MP) ( 比 利 時(shí) 輝 瑞 公 司，批 號(hào) M96447 ) ; 注 射 用 青 霉 素 鈉 ( 80 萬(wàn)單位，西南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào) 170309) 。

1. 3 動(dòng)物

SPF 級(jí) NIH 小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量 18～ 22 g， 由廣 東 省 醫(yī) 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物 中 心 提 供， 合 格 證 號(hào) 44007200027585; SPF 級(jí) SD 大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～ 220 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 心提供，合 格 證 號(hào) 4400720029427 ( 血瘀模型) 、44007200035572 ( 激素性股 骨頭 壞 死 模 型) 。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn) 許可證號(hào) SCXK ( 粵) 2013-0002，飼養(yǎng)于廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院 SPF 級(jí)動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)室，設(shè)施使用許可證號(hào) SYXK ( 粵) 2015-0059。

2 方法

2. 1 制備方法

2. 1. 1 樣品一

按處方比例稱取 6 036 g 飲片，取 152 g 白 芍粉碎成細(xì)粉，柳豆葉加水煎煮 2 次，第 1 次加 12 倍量水 提取 1. 5 h，第 2 次加 12 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液， 濾過(guò)，濾液濃縮成稠膏 1; 取川芎、當(dāng)歸一起加 6 倍量水 浸泡 1 h 后提取 6 h，收集揮發(fā)油，藥渣與剩余白芍及其余 飲片加水煎煮 2 次，第 1 次加 12 倍量水提取 1. 5 h，第 2次加 10 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液，濾過(guò)，濾液濃縮 成 1 g 稠膏相當(dāng)于 1～ 1. 5 g 飲片的清膏，加入乙醇充分?jǐn)嚢? 以使含醇量達(dá) 65%，靜置 24 h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃 縮成稠膏 2。合并稠膏 1、2，加入白芍細(xì)粉混勻，干燥， 粉碎，再加入揮發(fā)油混勻，制成 1 g 干浸膏含 5. 08 g 飲片。

2. 1. 2 樣品二

按處方比例稱取 6 036 g 飲片，川芎、當(dāng) 歸一起加 6 倍量水浸泡 1 h 后提取 6 h，收集揮發(fā)油，藥 渣、熟地黃加水煎煮 2 次，第 1 次加 12 倍量水提取 1. 5 h， 第 2 次加 10 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液，濾過(guò)，濾液 濃縮成稠膏 1; 柳豆葉、白芍等其余飲片加水煎煮 2 次， 第 1 次加 15 倍量水提取 1. 5 h，第 2 次加 10 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液，濾過(guò)，濾液濃縮成 1 g 稠膏相當(dāng)于 1～ 1. 5 g 飲片的清膏，加入乙醇充分?jǐn)嚢枰允购剂窟_(dá) 65%， 靜置24 h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏 2。合并稠膏 1、2，混勻，干燥，粉碎，再加入揮發(fā)油混勻，制成 1 g 干浸膏含 4. 17 g 飲片。

3 結(jié)果

正常組大鼠股骨頭組織外膜完整，骨小梁 緊密排列，沒(méi)有出現(xiàn)斷裂損傷，其小梁上無(wú)空骨陷窩; 模型組大鼠股骨頭組織外膜出現(xiàn)破裂，不完整，骨小梁破壞 程度大，呈現(xiàn)斷裂不規(guī)則現(xiàn)象，其上方有明顯空骨陷窩。

4 討論

化瘀骨合方原為臨床湯劑，前期將其制成膠囊劑，但 由于提取物引濕性較強(qiáng)，內(nèi)容物易出現(xiàn)結(jié)塊; 片劑具有劑 量準(zhǔn)確，質(zhì)量穩(wěn)定，服用、攜帶、儲(chǔ)存方便，機(jī)械化生產(chǎn)， 產(chǎn)量大，成本低等優(yōu)點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)擬將其開(kāi)發(fā)成該劑型。 研究表明，柳豆葉中黃酮類成分具有加快成骨轉(zhuǎn)化作 用，木豆素具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗?jié)B出等作用; 白芍中芍 藥苷具有改善血液流變學(xué)、抑制血小板凝集等作用; 川 芎、當(dāng)歸揮發(fā)油具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，阿魏酸、川芎嗪具有 抑制血小板聚集、改善骨髓微環(huán)境等作用; 熟地黃中 毛蕊花糖苷能明顯抑制破骨細(xì)胞的分化和形成，多糖可增 強(qiáng)人體的造血、免疫功能，由此可知，與化瘀骨合方 功能主治及藥理作用相關(guān)的有效物質(zhì)主要為揮發(fā)性成分及 芪類、黃酮類、苷類、多糖類、有機(jī)酸類等水溶性成分。 本實(shí)驗(yàn)在原膠囊劑工藝 ( 工藝一) 的基礎(chǔ)上根據(jù)上述成分 性質(zhì)，采用水作為提取溶劑，同時(shí)為了保證制劑成型，研 究揮發(fā)油、多糖對(duì)本方功效作用的貢獻(xiàn)程度，又設(shè)計(jì)了分 別保留揮發(fā)油或多糖的提取工藝，通過(guò)藥效實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化， 其中工藝二保留揮發(fā)油、多糖成分，工藝三保留多糖而不 保留揮發(fā)油，工藝四保留揮發(fā)油而不保留多糖。

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