1 材料與設(shè)備
1.1 材料
高精密電子天 平 梅 特 勒-托 利 多 儀 器(上 海)有 限公司;手提式壓力蒸汽滅菌器 浙江新豐醫(yī)療器械 有限公司;上海一恒LRH-250生化培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司;潔凈工作臺 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備 廠;紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé) 任公司;移液槍 大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司; 高轉(zhuǎn)速離心機(jī) 北京京立離心機(jī)有限公司;精密恒溫 水浴槽 杭州雪中炭恒溫技術(shù)有限公司。黑豆:購自山東省青島市四方利群集團(tuán)股份有限 公司;納豆芽孢桿菌(BN-3-1):篩選自日本濱梨納豆。
2 試驗(yàn)方法
用比濁法測定納豆菌生長曲線,取實(shí)驗(yàn) 室保藏的菌種進(jìn)行活化,每隔3h利用分光 光 度 計(jì) 測 定二次 活 化 后 的 納 豆 菌 液 的 光 密 度,測 到 第36h 為 止,利用光密度值可知菌液濃度。將測得的光密度 值(OD660)與所對應(yīng)的時(shí)間作圖,可繪出納豆菌的生長 曲線,取對數(shù)生長期的菌液進(jìn)行接種。精選黑豆→清洗→浸泡→蒸煮→接種→適當(dāng)條件 下發(fā)酵→冰箱中后熟→納豆成品。稱?。玻埃鐑?yōu)質(zhì) 黑 豆,用 清 水 清 洗 兩 三 遍,除 去 黑 豆表面雜質(zhì),加 入60mL 去 離 子 水,浸 泡 黑 豆。將 浸 泡好的黑豆瀝干水分,放進(jìn)121 ℃高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi) 蒸煮一定時(shí)間。煮熟的黑豆先進(jìn)行冷卻,冷卻到70℃ 左右接種一定量的納豆菌,攪拌均勻以保證豆子表面均勻沾滿菌液。接種納豆菌后的黑豆放入設(shè)定溫度的 恒溫培養(yǎng)箱發(fā)酵一定時(shí)間。將發(fā)酵好的黑豆進(jìn)行冷 藏,后熟7~8h,即可得到成熟的納豆。
3 結(jié)果與分析
觀察納豆芽孢桿菌BN-3-1的生長曲線,發(fā)現(xiàn)其基 本符合微生物生長周期的4個(gè)階段,應(yīng)接種15h的納 豆菌,此時(shí) 的 納 豆 菌 正 處 于 對 數(shù) 生 長 期。0~6h 為 BN-3-1的調(diào)整期,6~15h為 BN-3-1的對數(shù)生長期, 15~24h為 穩(wěn) 定 期,并 從24h開 始 轉(zhuǎn) 為 衰 亡 期。因 此,選取對數(shù)生長期的15h作 為 BN-3-1的 最 適 發(fā) 酵 種齡。
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